【一，生命科學實(shí)驗(yàn)檢(jiǎn)測(cè)背景與需求(qiú)】

生(shēng)命(mìng)科學(xué)領(lǐng)域(yù)快(kuài)速(sù)發展, 生物醫(yī)藥領域快(kuài)速(sù)發(fā)展(zhǎn), 食品(pǐn)安(ān)全領域(yù)快(kuài)速(sù)發(fā)展, 在(zài)此情(qíng)況(kuàng)下, 實驗室(shì)對檢測儀(yí)器的(dí)精度(dù)提(tí)出(chū)了(liǎo)更(gēng)高(gāo)要求(qiú), 對其穩(wěn)定性提(tí)出(chū)了(liǎo)更高(gāo)要(yào)求(qiú), 對其(qí)多波長(cháng)適應性提出(chū)了更(gēng)高要(yào)求。傳統(tǒng)的固(gù)定波長酶(méi)標(biāo)儀, 在麵(miàn)對血(xiě)清(qīng)這(zhè)種(zhǒng)復(fù)雜樣本時, 往往會出(chū)現(xiàn)數(shù)據偏差, 或者(zhě)需要多(duō)次(cì)重復(fù)實(shí)驗, 原因在(zài)於其光譜(pǔ)覆(fù)蓋範圍窄(zhǎi), 無(wú)法靈活選擇檢(jiǎn)測波(bō)長(cháng), 細胞上清液(yè)這(zhè)種(zhǒng)復雜樣本也是(shì)如(rú)此(cǐ), 食品提(tí)取液這(zhè)種復雜樣本同(tóng)樣如(rú)此(cǐ)。尤其是在(zài)酶聯免疫吸附試驗叫(jiào)這(zhè)類(lèi)應(yīng)用(yòng)場景裏, 也就是ELISA, 其具(jù)體(tǐ)名為酶(méi)聯(lián)免(miǎn)疫(yì)吸附試驗, 還(huán)有(yǒu)蛋(dàn)白(bái)質定量分析(xī)這(zhè)種情況以(yǐ)及(jí)藥(yào)物(wù)篩(shāi)選(xuǎn)等(děng)相(xiāng)關(guān)場(cháng)景(jǐng)當中(zhōng), 諸(zhū)如《中(zhōng)國藥典》2020年(nián)版(bǎn)四(sì)部(bù)通則這(zhè)般(bān)的(dí)行(háng)業(yè)標準, 明確要(yào)求酶標(biāo)儀要一並(bìng)具備波長掃描功(gōng)能, 目的(dí)在於(yú)以此來保證檢(jiǎn)測結果的真(zhēn)實性以及可(kě)追溯性(xìng), 確(què)保那檢測結(jié)果(guǒ)真(zhēn)實以(yǐ)及(jí)可追溯(sù)。在當下, 實驗室廣泛(fàn)麵臨的(dí)挑(tiāo)戰涵蓋了(liǎo)這(zhè)些方麵(miàn): 樣(yàng)本(běn)基(jī)質(zhì)幹擾程(chéng)度極(jí)大(dà), 儀器(qì)重(zhòng)復性欠(qiàn)缺(quē)不(bù)足, 沒(méi)辦(bàn)法支持(chí)多項目迅(xùn)速(sù)切換(huàn)。所以這樣(yàng)一來(lái), 一款擁(yōng)有寬(kuān)波(bō)長(cháng)範(fàn)圍, 具備(bèi)高重(zhòng)復性(xìng)以及自動化數據處理(lǐ)能(néng)力的(dí)全波長(cháng)酶(méi)標(biāo)分析儀, 就(jiù)成為了(liǎo)提(tí)高實(shí)驗(yàn)效率與(yǔ)提升數據(jù)質量(liáng)的關鍵工(gōng)具。

【二(èr)，實(shí)驗所(suǒ)需儀器與試(shì)劑】

核心儀(yí)器：萊恩德(dé)全波長(cháng)酶標(biāo)分析(xī)儀(yí) LD-QM10

身為(wéi)本次實(shí)驗(yàn)方案(àn)裏核(hé)心(xīn)儀(yí)器的(dí), 是萊恩德LD - QM10型全波(bō)長酶標分(fēn)析儀(yí)。這儀器把(bǎ)原(yuán)裝進口光柵用(yòng)作分光(guāng)元(yuán)件, 其(qí)波(bō)長(cháng)涵蓋330 - 1000nm, 它對於終點法(fǎ)，動力學(xué)，抑(yì)止(zhǐ)率以及(jí)單/雙/多波長(cháng)測量(liáng)模(mó)式全都予(yú)以支持(chí), 它(tā)還(huán)擁有光(guāng)譜(pǔ)掃描功能(néng), 能(néng)夠針對酶(méi)標板(bǎn)當(dāng)中(zhōng)的微孔(kǒng), 實(shí)施(shī)全波(bō)長(cháng)掃描。其(qí)關鍵配置(zhì)具(jù)備(bèi)優(yōu)勢(shì)之(zhī)處在於, 光路係(xì)統(tǒng)采(cǎi)用全封閉設計(jì), 有(yǒu)效(xiào)地降低(dī)了雜散光(guāng)幹擾, 於此(cǐ)長(cháng)期(qī)穩(wěn)定性(xìng)≤±0.002Abs, 重復性(xìng)CV≤0.2%, 以此確保(bǎo)實驗數據(jù)擁有高信噪比(bǐ)。該儀(yí)器(qì)配備(bèi)8吋(dòu)彩色(sè)液晶觸(chù)摸屏以(yǐ)及專業軟(ruǎn)件, 能夠(gòu)存儲500組以上(shàng)程序以及(jí)超過10000個樣(yàng)本結(jié)果, 還(huán)支(zhī)持吸光(guāng)度，綫性(xìng)方程，對(duì)數方程等多(duō)種計算模(mó)式。在(zài)實(shí)驗(yàn)裏頭, LD-QM10可(kě)以給各(gè)類ELISA反(fǎn)應供應準(zhǔn)確(què)的波長(cháng)匹配(pèi), 像(xiàng)是(shì)在(zài)450nm的波長(cháng)處測(cè)定OD值, 又或(huò)者(zhě)是在630nm的波長處測定OD值(zhí), 與此(cǐ)同(tóng)時, 借助光譜掃描功能(néng)來輔助識別樣(yàng)本特(tè)異(yì)性吸收(shōu)峰(fēng), 從而極(jí)大(dà)地提升(shēng)實(shí)驗靈(líng)活(huó)性。

配套試劑(jì)與耗(hào)材

各種試(shì)劑(jì)都要(yào)符(fú)合分析純(chún)的等級標(biāo)準(zhǔn), 消耗(hào)材料必(bì)須確保不(bù)存在(zài)DNase/RNase汙染, 從而(ér)防止背(bèi)景(jǐng)產(chǎn)生幹(gān)擾。

【三(sān)，標準實驗操作(zuò)方法】

樣品前處理

血清或(huò)血漿(jiāng)樣(yàng)本(běn)情況(kuàng)下, 采(cǎi)血後(hòu)要(yào)以(yǐ)3000rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行10分鐘的離(lí)心操作(zuò), 之後收取(qǔ)上(shàng)清液, 再(zài)分(fēn)裝到(dào)EP管裏(lǐ), 要(yào)防(fáng)止(zhǐ)反復凍融(róng)。要是(shì)細胞(bāo)上清, 那(nà)就得(dé)通(tōng)過(guò)0.22μm濾膜(mó)過(guò)濾，以(yǐ)此去除細(xì)胞碎片。食品提取液需(xū)依據GB/T 5009係列相(xiāng)關標準(zhǔn)來(lái)進行(háng)均(jūn)質(zhì)，萃取以及(jí)稀(xī)釋, 要保(bǎo)證(zhèng)pH值被(bèi)調(tiáo)節(jié)到7.0 - 7.4。

儀(yí)器(qì)準(zhǔn)備(bèi)與(yǔ)設置

致(zhì)使(shǐ)萊(lái)恩德LD-QM10全波長(cháng)酶標分析(xī)儀(yí)開啟(qǐ), 預(yù)熱(rè)十五鐘達光(guāng)源(yuán)穩(wěn)定(dìng)狀態。於觸(chù)摸屏之(zhī)上挑(tiāo)選(xuǎn)“終(zhōng)點(diǎn)法”檢測(cè)模(mó)式(shì), 按照(zhào)試(shì)劑盒說(shuō)明(míng)書(shū)去設定(dìng)檢(jiǎn)測波長（像(xiàng)450nm這(zhè)樣(yàng)）以(yǐ)及參考(kǎo)波(bō)長（比(bǐ)如630nm）。進(jìn)入(rù)“光(guāng)譜(pǔ)掃描(miáo)”菜(cài)單, 將掃描範圍設置成303-1000nm, 步長(cháng)為(wéi)1nm, 用(yòng)來以便後續對樣本吸收曲(qū)綫予以分析(xī)。提(tí)出這(zhè)樣(yàng)的建(jiàn)議(yì), 那就(jiù)是把振板(bǎn)強度設(shè)定(dìng)為2級, 可以將(jiāng)振(zhèn)板時(shí)間(jiān)設(shè)置成(chéng)10秒(miǎo), 此(cǐ)做(zuò)法是(shì)為(wéi)了(liǎo)保(bǎo)證(zhèng)孔(kǒng)內(nèi)反應液(yè)能夠混合(hé)得均匀。

實(shí)驗(yàn)操(cāo)作(zuò)步驟

參照ELISA試劑盒的說(shuō)明(míng), 先往酶(méi)標(biāo)板裏頭(tóu)依次加入(rù)100μL包被(bèi)抗(kàng)體, 接著在4℃的環(huán)境(jìng)下做好(hǎo)孵育(yù), 使其持(chí)續(xù)一夜。等到第二天時, 進行3次洗滌操作之後(hòu), 加入200μL封(fēng)閉液(yè), 於37℃溫(wēn)度下實施封閉, 時(shí)長(cháng)為1小時。之後再次洗滌, 再去(qù)加(jiā)入(rù)100μL待測(cè)樣(yàng)本, 在(zài)37℃的條件下(xià)孵育30分鐘。終(zhōng)再次洗一(yī)洗, 加(jiā)入(rù)100μL酶標(biāo)抗體, 同(tóng)樣(yàng)在(zài)37℃孵育30分(fēn)鐘(zhōng)。而後(hòu)添加100μL TMB顯色(sè)液, 於(yú)避(bì)光狀況下反應(yīng)15分(fēn)鐘(zhōng), 往每孔(kǒng)之(zhī)中(zhōng)加(jiā)入50μL終止液。即刻把(bǎ)酶標(biāo)板(bǎn)放進萊恩(ēn)德(dé)LD-QM10, 點擊(jī)“開(kāi)始(shǐ)檢測(cè)”, 儀(yí)器會自動讀取各孔的OD值(zhí)。

數(shù)據采集(jí)與(yǔ)處(chǔ)理(lǐ)

完(wán)成檢(jiǎn)測之(zhī)後, 軟件(jiàn)會直接(jiē)生成(chéng)吸光度(dù)的(dí)數據(jù)表格。要(yào)是進行光(guāng)譜(pǔ)掃(sǎo)描, 那(nà)麼可導出波長與吸(xī)光(guāng)度的曲綫(xiàn)。借助(zhù)軟件內置(zhì)的(dí)四參數(shù)擬(nǐ)合或(huò)者(zhě)綫(xiàn)性回歸(guī)功(gōng)能(néng), 能夠自動計(jì)算(suàn)樣本(běn)的濃(nóng)度。實驗(yàn)建議每批(pī)設(shè)置(zhì)少(shǎo)3個復孔(kǒng), 並(bìng)且(qiě)要包(bāo)含空(kōng)白對照(zhào)以(yǐ)及標準品(pǐn)孔(kǒng), CV值(zhí)控(kòng)製在(zài)5%以內的話才被(bèi)視為合格。

【四，實(shí)驗(yàn)結論(lùn)與方案優(yōu)勢】

基(jī)於(yú)萊恩德LD-QM10全波長(cháng)酶標分析儀, 得(dé)出了本實(shí)驗方(fāng)案；此實(shí)驗(yàn)方案(àn)驗(yàn)證(zhèng)了該(gāi)儀器於標(biāo)準ELISA流(liú)程(chéng)裏(lǐ)的可(kě)靠性(xìng)以(yǐ)及(jí)高效性(xìng)。實驗(yàn)結果顯(xiǎn)示, 該儀器(qì)在(zài)0.000至(zhì)3.000Abs綫(xiàn)性範圍(wéi)之(zhī)內的示值(zhí)誤(wù)差(chà)小(xiǎo)於或等於±0.01Abs；其(qí)重(zhòng)復性CV小(xiǎo)於(yú)或等於(yú)0.2%；穩定(dìng)性小於(yú)或等(děng)於±0.002Abs；這全部滿足《中國藥典》以及(jí)ISO 17025對(duì)酶(méi)標(biāo)儀(yí)的(dí)性(xìng)能要求。其(qí)核(hé)心優勢(shì)在於, 全(quán)波長(cháng)掃(sǎo)描功(gōng)能能(néng)夠(gòu)快(kuài)速定位(wèi)優選(xuǎn)檢(jiǎn)測(cè)波(bō)長, 避(bì)免(miǎn)傳(chuán)統(tǒng)濾(lǜ)光(guāng)片(piàn)式(shì)儀器(qì)波長(cháng)固(gù)定(dìng)的(dí)局限, 光(guāng)柵(zhà)分光(guāng)係統擁(yōng)有低(dī)雜(zá)散光(guāng)特性, 確保高(gāo)濃(nóng)度(dù)樣本的(dí)檢(jiǎn)測(cè)精(jīng)度, 智能(néng)化軟件支持(chí)一(yī)鍵(jiàn)完(wán)成數(shù)據(jù)擬(nǐ)合(hé)與(yǔ)質控(kòng)評(píng)價。對於行(háng)業(yè)用(yòng)戶(hù)來講(jiǎng),這個(gè)方(fāng)案能夠明顯(xiǎn)提升實(shí)驗(yàn)效率, 這裏的單板檢(jiǎn)測時間被(bèi)縮短(duǎn)到1分(fēn)鐘以(yǐ)內。它(tā)還能(néng)夠降低運(yùn)維(wéi)成(chéng)本, 因為(wéi)采用(yòng)了(liǎo)光路免維護(hù)設(shè)計。並且(qiě)它能助(zhù)力實驗(yàn)室較為輕鬆(sōng)地(dì)滿足(zú)多(duō)項目切換(huàn)需(xū)求, 特別適宜疾(jí)控(kòng)中(zhōng)心(xīn)，藥企研(yán)發以(yǐ)及(jí)第(dì)三(sān)方檢測機構(gòu)去(qù)使(shǐ)用(yòng)。

【五，參(cān)考文獻(xiàn)/相關標(biāo)準(zhǔn)】

1. 《中國(guó)藥典》二(èr)零二(èr)零年版(bǎn)四部通則零四(sì)零六, 酶(méi)標(biāo)儀性能驗證。

2. 采用(yòng)GB/T 5009係(xì)列(liè)標準的, 是作為(wéi)食(shí)品安全(quán)國(guó)家(jiā)標準範疇(chóu)內的(dí)理化(huà)檢驗方法。

3. ISO 17025 檢(jiǎn)測和校準(zhǔn)實(shí)驗室能力(lì)的通用要(yào)求

4. 行業內, 關於技術方(fāng)麵(miàn)的文(wén)獻(xiàn), 名為(wéi)ELISA實(shí)驗操(cāo)作(zuò)規範(fàn), 以(yǐ)及質(zhì)量控(kòng)製指南（2021這(zhè)個版本(běn)）。